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植物胚乳α-amylase活性的測定

今天的實驗要作植物胚乳中α-amylase活性的測定。

植物種子發芽時,胚乳會產生大量的α-amylase來分解儲存的澱粉,經過轉化成為幼苗生長發育所需要的成分,直到幼苗破土而出,可以自己進行光合作用為止。

有些植物的種子(如小麥),發芽時只會產生α-amylase來分解澱粉;而玉米(這次的實驗材料)以及大麥,在發芽時除了會產生α-amylase以外,還會產生β-amylase。

在這個實驗裡,我們只要測定α-amylase。至於裡面的β-amylase怎麼去除呢?我們利用β-amylase不耐熱的特性,將萃取出來的酵素溶液放在70℃加熱一段時間,就可以去掉β-amylase的活性。

我們這次要測定的是由一天大、三天大、五天大的玉米胚芽中分離出來的酵素。但是給大家的是以A、B、C標記的未知樣品,大家要經由測定酵素活性的曲線,來推斷究竟哪一個是一天大、三天大、五天大的胚芽萃取出來的?


實驗簡單的流程如上圖:將0.25ml的酵素萃取液加入4.75ml的澱粉反應液(澱粉反應液要先預熱),快速混和後取出0.5ml加入5ml的碘液中,做為時間原點。

2分鐘、5分鐘、10分鐘、15分鐘各取出0.5ml加入5ml的碘液中。加入碘液後混和再用分光光度計測量。

由於碘液主要是與反應液中的澱粉反應,所以如果酵素的確有跟澱粉反應,分光光度計所讀出的數值,應該會隨著時間過去而降低才是。

A、B、C三個樣本做完後,畫出三條反應曲線,根據反應曲線,哪一個樣品是一天、三天、五天大的玉米胚芽呢?

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